近年来,随着人口老龄化加剧,癌症、自身免疫性疾病患者基数增长,单克隆抗体 (MAb) 疗法市场规模持续增长。单克隆抗体(MAb)的生产和纯化具有高挑战性,因为这些分子容易发生多种类型的翻译后修饰,这可能会降低其功效并影响其保质期。超过三分之一的 MAb 和重组蛋白治疗剂是糖蛋白,糖基化是这些生物治疗药物常见且重要的翻译后修饰。这是因为添加到蛋白质上的糖链会影响免疫原性,从而影响其作为治疗剂的有效性。
传统的方法是必须周期性的花费大量时间提取样品、制备样品、然后等待高效液相色谱 (HPLC)、毛细管电泳 (CE) 和质谱 (MS)等方法的结果。
布鲁克Tornado高通量增强技术(HTVS)在线拉曼光谱仪:HTVS高通量增强狭缝技术使得拉曼性能比传统拉曼技术提高了10倍以上。可通过探头实时获取蛋白质修饰过程中蛋白质糖基化信息。
牛胰腺核糖核酸酶蛋白RNase A 和 RNase B具有相同的一级、二级和三级结构,但糖基化不同。RNase B 有一个一糖基化位点而RNase A 中不存在单一糖基化位点
绿色显示的是天冬酰胺残基,在RNase B中携带糖残基,在RNase A中没有糖残基。
Hyperflux PRO Plus™连接探头测量在磷酸钠和氯化钠缓冲液中RNase A和RNase B拉曼光谱图在酰胺I和酰胺III区域有明显差异
RNase A(蓝色),RNase B(红色)
为进一步对RNase A和RNase B进行定量, Hyperflux PRO Plus™采集梯度浓度样品后分别构建RNase A和RNase B的PLS模型。
RNase A定量模型
RNase B 定量模型
通过布鲁克Tornado HTVS高通量增强技术在线拉曼光谱仪可以实现蛋白质糖基化的实时监测。实时评估蛋白质翻译后修饰(如,糖基化)将为蛋白质治疗药物创造实时放行检测(RTRT)可能性的目标。为药品生产企业提供巨大的价值,如减少库存、降低实验室成本和提高投资回报率。